세포배양에 의한 약용식물의 유식물체 생산과정 및 방법

 

① 세포상태로 쉽게 유리될 수 있는 부서지기 쉬운 특수한 배발생캘러스를

    고체(한천)배지에서 배양

② 증식이 빠르고 배발생능력이 높은 세포를 지닌 캘러스를 선발하여

    액체배지에 넣고 현탁배양

③ 액체배지에서 현탁배양하여 단세포 및 소세포군 상태로 유리된 배발생세포 확보

④ 배발생세포를 호르몬 첨가하지 않은 액체(MS)배지에서 현탁배양하여 분열 증식

                       

⑤ 증식된 세포를 그물망으로 걸러 크기별로 분류하고

    ㆍ일부는 증식용 배발생세포로 다시 사용

    ㆍ나머지는 액체(MS)배지에서 계속 현탁 배양하여 체세포배 유도(Shaker로 배양)

⑥ 유도된 체세포배를 액체(MS)배지에서 일정기간 동안 수차례 계대배양

     (Shaker로 계속 배양)

⑦ 성장한 체세포배를 Bio-reactor(또는 톤단위의 탱크배양기)로 옮겨 배양하여
    유식물체를 대량 유도

⑧ 2∼3㎝ 정도 자란 유식물체를 배양기로 수거

 

               ※ 상기 과정 중 ①, ②, ③은 배발생세포 확보 단계로 초기 1회에 한하여

                       연구실에서 수행되며, 이후 배양실에서는 증식된 세포를 배발생세포로

                       다시 사용함으로써(⑤→④) 별도의 배발생세포 확보 노력없이 영구적인

                       배양 작업이 가능. ④에서부터 ⑧까지는 약 2∼3개월의 기간 소요